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恒温恒湿培养箱的湿度调节通常采用两种方式控制箱体内湿度。
一、是采用被动控湿法，即通常在培养箱内均放置一个3L的水盘，内盛3L低菌纯水，37度的温度，水自然蒸发，使箱体内湿度达到95%。
二、是一些的培养箱，采用主动加湿系统(蒸汽发生器，加热水盘，喷雾器等)，可以控制箱体内的湿度，如低温培养时就需要主动加湿的方法。
恒温恒湿培养箱湿度调节：按下湿度设定按钮，数字显示即为设定值，旋转湿度调节电位器到所需湿度值，松开按钮，数字显示即为霉菌培养箱内的实际湿度。当培养室内的实际湿度比设定的湿度小时，此时加湿对培养室内加湿，加湿指示灯亮；当培养室内的实际湿度比设定的湿度值大时，此时加湿器停止工作，加湿指示灯灭。
恒温恒湿培养箱湿度调节使用，一些常规的操作注意事项：
1.当采用被动控湿法时，应定期(至少每两周一次)倒掉位于箱内底部积水盘内的积水，控制水盘内污染。
2.采用主动加湿的方式就不存在污染问题。
3.在温湿过程中启动压缩机是为了除湿降湿，属正常情况。
4.当湿度传感器长时间处于湿状态，会形成结露即湿度显示值会居不下，若需要准确的湿度显示值，则应关机后，将培养箱箱门打开，让湿度传感器处于室温中，自然干燥后，即可继续使用。
